蹄叶橐吾中脂溶性成分的气相色谱-质谱联用分析_药学论文
蹄叶橐吾中脂溶性成分的气相色谱-质谱联用分析_药学论文
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第一篇 蹄叶橐吾中脂溶性成分的气相色谱-质谱联用分析_药学论文
作者：朴香兰，秘效媛，朴惠善，田燕泽
【摘要】 目的通过研究蹄叶橐吾中的脂溶性成分，为蹄叶橐吾的开发和利用提供实验依据。方法以氯仿为溶剂超声提取蹄叶橐吾的脂溶性成分，利用气相色谱-质谱联用仪对提得物质进行分离和鉴定。采用色谱峰面积归一化法确定脂溶性各组成成分的相对含量。结果共分离出33个峰，鉴定了其中19个成分，占脂溶性总成分的71.58%。结论蹄叶橐吾的脂溶性成分主要为d-柠檬烯（2.98%）、(e)-3,7-二甲基-1,3,6-辛三烯（15.07%）、(e,z)-2,6-二甲基-2,4,6-辛三烯（3.61%）、石竹烯（3.62%）、2,6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)-二环［3.1.1］庚-2-烯（6.20%）、α-法呢烯（4.09%）、反式角鲨烯（26.91%）等。
【关键词】 蹄叶橐吾 脂溶性成分 气相色谱-质谱联用
abstract：objectiveto provide the foundation for reasonable utilization by yzing the liposoluble components of ligularia fischeri.methodswith chloroform as solvent, the liposoluble constituents in ligularia fischeri were extracted by ultrasonic extraction. the extracted substances were isolated and identified by gc-ms. the relative content of each constituent in liposoluble components was ascertained by peak area normalization of chromatogram. results41 components were identified, which took up 71.58% of the total amount.conclusionthe main components of liposoluble components are d-limonene, (e)-3,7-dimethyl-1,3,6-octatriene, (e,z)-2,6-dimethyl-2,4,6-octatriene, caryophyllene, 2,6-dimethyl-6-(4-methyl-3-pentenyl)-bicyclo［3.1.1］hept-2-ene, alpha-farnesene, and (all-e)-2,6,10,15,19,23-hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaene.
key words： ligularia fischeri； liposoluble components； gc-ms
蹄叶橐吾ligularia fischeri为菊科（compasitae）橐吾属（ligularia）多年生草本植物，又名肾叶橐吾（《中药志》）、马蹄叶（东北）、葫芦七（陕西）、马蹄当归（贵州）等，其根和根茎收入吉林省药品标准［1］，名山紫菀，在吉林省延边各县均有分布，是朝的膳食之一。Www.meiword.CoM该植物性温，味辛、苦, 有温肺下气、镇咳祛痰、理气活血、止痛、利尿、止血之功能［2］，其叶用于治疗黄疸、猩红热、风湿性关节炎和肝脏疾病［3,4］。朝民间用蹄叶橐吾的叶作健胃开胃药、化痰药，作野菜有几种烹调方法。其全草收入《蒙药正典》，蒙药名为汗达盖-赫勒。蒙药味甘、苦，性凉，稀、柔、轻、糙、动，催吐、解毒、愈伤，燥“希日乌素”，主治寒性“协日”病“协日”性头痛，食积不消，胃痞，铁锈“巴达干”，中毒症，肠痧，虫痧，肺脓肿等。蹄叶橐吾中脂溶性化学成分的研究尚未见报道，本研究采用gc-ms法对蹄叶橐吾的氯仿提取物进行了测定。从中鉴定出19个化合物，为进一步研究蹄叶橐吾的化学成分提供了一定依据。
1 仪器与材料
美国agilent 6890/5973n gc/msd气相色谱-质谱联用仪，kq-500e型超声波清洗器。蹄叶橐吾系20xx-08采于吉林省延边朝鲜自治州图们市，并经民族大学中国少数民族传统医学研究院朴香兰副教授鉴定为ligularia fischeri全草。氯仿为纯。
2 方法
2.1 蹄叶橐吾脂溶性成分提取取干燥蹄叶橐吾叶1.5 g，以氯仿为溶剂，5的溶剂比（g/ml）超声提取30 min。
2.2 gc-ms测试条件
2.2.1 气相色谱条件色谱柱为db-5弹性石英毛细管柱(30 mm×0.25 mm，0.25 μm)，气化室温度为250℃，色谱的升温条件：初始温度50℃，保持3 min后以3 ℃/min的速度升至280℃并保持10 min；载气he；进样口温度为250℃；接口温度280℃；不分流；进样量1 μl。
2.2.2 质谱条件ei离子源，温度为230℃，电子能量为70ev，扫描范围50-550 amu（m/z）。
3 结果
蹄叶橐吾的氯仿提取物直接进样，按照gc-ms条件测定其中的脂溶性成分，共分离得到33个峰，总离子流图见图1。通过nist02.l标准质谱图库进行检索鉴定各化合物，按峰面积归一化法计算出有关的相对含量，共鉴定出19个化合物，占脂溶性总成分的71.58%，鉴定结果见表1。表1 蹄叶橐吾中的脂溶性化学成分（略）
4 结论
结果表明，蹄叶橐吾中脂溶性主要成分为d-柠檬烯（2.98%）、(e)-3,7-二甲基-1,3,6-辛三烯（15.07%）、(e,z)-2,6-二甲基-2,4,6-辛三烯（3.61%）、石竹烯（3.62%）、2,6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯)-二环［3.1.1］庚-2-烯（6.20%）、α-法呢烯（4.09%）、反式角鲨烯（26.91%）等。本研究通过对蹄叶橐吾中脂溶性化学成分的研究，为蹄叶橐吾的开发利用提供了科学依据。
【参考文献】
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第二篇 气相色谱-质谱联用法分析羊脂油的脂肪酸成分_药学论文
作者：黄兰岚, 李娆娆, 钟利群, 原思通, 黄璐琦
【摘要】 目的采用气相色谱-质谱联用（gc-ms）对羊脂油的脂肪酸成分进行，为其质量标准的制订提供实验依据。方法将羊脂油样品甲酯化后，用gc-ms对其脂肪酸类成分进行，面积归一化法测定各成分的相对含量。结果羊脂油中含16种脂肪酸成分，包括不饱和脂肪酸9种，占54.48％，主要为油酸（34.45％）、反式9-十八碳烯酸（10.16％），还有少量的亚油酸（1.37％）；饱和脂肪酸有7种，占40.13％，主要为棕榈酸（21.59％）、硬脂酸（13.49％），肉豆蔻酸（2.15%）。结论该结果确定了羊脂油的成分组成，有助于对其进行进一步的研究。
【关键词】 羊脂油 脂肪酸 气相色谱-质谱联用
abstract：objectiveto yze the fatty acid of sheep’s oil by gc-ms. methodsafter methyl esterification, the test sample was yzed by gc-ms. the relative contents of various components were determined by area normalization method. resultsthere were 16 kinds of fatty acid in the sheep’s oil in total, containing 9 kinds of unsaturated fatty acid and 7 kinds of saturated fatty acid. the content of unsaturated fatty acids was 54.48% containing oleic acid, 34.45% and 9-octadecenoic acid (e), 10.16%, respectively. there was a little linoleic acid in the oil and its content was 1.37%. the content of saturated fatty acids was 40.13%, containing palmic acid, 21.59%, stearic acid, 13.49% and tetradecanoic acid, 2.15%, respectively.conclusionthe result showed composition of sheep’s oil. this study will give us the basis for the further study.
key words：sheep’s oil; fatty acid; gc-ms
羊脂油来源于牛科动物山羊capra hircus linnaeus或绵羊ovis aries linnaeus的脂肪油，甘、温，具有补虚、润燥、祛风、解毒的功效，主要治疗虚劳羸瘦、久痢、口干便秘、肌肤皲裂等症［1］。WwW.meiword.coM用本品炮制药材能够达到“增效”的目的，如羊脂油炙淫羊藿，可以增强淫羊藿的温肾助阳作用［2］。
羊脂油作为常用炮制辅料，尚未制订其药用质量标准，仅在食品标准中对其外观形状等制订了一些理化指标限度要求。为了规范羊脂油的使用，本研究首次采用气相色谱－质谱联用（gc-ms）技术对其脂肪酸类成分进行，以期对其质量标准研究提供实验数据［2］。
1 仪器与材料
trace gc-ms气质联用色谱仪，fid检测器。
色谱条件：hp-5（0.25 μ m × 30 m, 0.25 mm）毛细管柱；程序升温，初始温度100 ℃，保持5 min，以8 ℃/min升至180 ℃，再以28 ℃/min升至230 ℃；进样口温度250 ℃；载气n2；检测器温度250 ℃；分流比为20∶1；进样量0.1 μl。
质谱条件：离子源为ei；电子能量70 ev；离子源温度200℃；接口温度250℃；溶剂切割4 min；扫描质量范围m/z 35～688；扫描周期0.6 s/dec，用nist标准质谱库检索。
羊脂油购自食品公司，经本文作者鉴定为牛科动物绵羊ovis aries linnaeus的脂肪油。
2 方法与结果
2.1 样品制备取羊脂油样品200 g切成小块，于120℃炼制，待出油量不再增加，去渣取油，备用。
2.2 供试品溶液制备取0.4 g 羊油样品，置于50 ml锥形瓶，加入15 ml 0.5 mol/l的koh-meoh溶液，于60 ℃水浴20～30 min，至黄色油珠完全消失为止，冷却后，再加10 ml 14 %的三氟化硼乙醚溶液，水浴5 min，取出冷却后，加入10 ml正己烷和10 ml氯化钠饱和溶液，振摇，取上层溶液备用。
2.3 样品测定对羊脂油样品的总离子流色谱图通过nist标准质谱库进行检索，并结合相关资料进行人工解析，确认了18种成分，归一化法计算出各峰面积的相对百分含量。见表1。表1 羊脂油的脂肪酸类成分组成（略）
3 讨论
羊脂油所含长链脂肪酸甘油酯［1］具有很高的沸点，如果直接进行，高温下脂肪酸甘油酯易分解；并且在色谱柱上如果要使各组分能够按脂肪酸的不饱和度分离，应使用极性固定相，而该类固定相的耐温性较差，从而限制了这种方法的应用。因此一般都要进行前处理，即脂肪酸衍生化，将脂肪酸甲酯化或乙酯化，一般选择甲酯化的方法，并以三氟化硼－甲醇法最为常用［3］。
本实验以120℃炼制的羊脂油为样品，采用三氟化硼－甲醇法对样品进行甲酯化处理，其产物经gc-ms ，取得满意的分离效果，经 nist谱图库检索，从中检出16种脂肪酸成分，占总气相色谱峰面积的94.61%。通过与标准谱图对照，，确定每一个成分的化学结构，按峰面积百分比法进行定量，分别求得各组成化合物的相对含量见表1，结果显示羊脂油所含不饱和脂肪酸有9种，包括油酸（34.45％）、反式9-十八碳烯酸（10.16％）、z-11-十八碳烯酸甲酯（3.30％）、棕榈油酸（2.03％）、7,10-十八碳二烯酸酸（1.69％）、亚油酸（1.37％）、2-己基环丙烷酸（1.09％）、10-十九烯酸（0.24％）、z-11-十四碳烯酸甲酯（0.15％）；饱和脂肪酸有7种，包括棕榈酸（21.59％）、硬脂酸(13.49%)、肉豆蔻酸(2.15%)、十七烷酸（1.34％）、十五烷酸(0.60%)、14-甲基棕榈酸（0.60％）、15-甲基棕榈酸（0.36％）。本实验结果与文献报道［1］相符，并进一步增加了成分的组成。
实验结果显示，羊脂油中油酸和棕榈酸的含量最高，二者的含量已经超过总脂肪酸量的50％，均具有降血脂、抗动脉粥样硬化、抗血小板聚集以及抗血栓形成等作用，此外亚油酸是人体必需的脂肪酸，具有防止血栓形成、软化血管、调节脂肪代谢，降低血中胆固醇的作用。
本实验对羊脂油的成分进行了初步研究，为该炮制辅料其真伪优劣的质量评价提供了切实可行的方法，为其质量标准的制定提供了实验数据。各地羊脂油的气相色谱结果将另文发表，其对所炮制饮片药理作用的影响正在进一步研究中。
【参考文献】
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［2］原思通.医用中药饮片学［m］.:卫生出版社, 20xx： 424.
［3］余珠花. 气相色谱法中油脂脂肪酸衍生化方法及其选择［j］.粮食加工，20xx,6: 64.
第三篇 六君子汤对顺铂增效减毒的实验研究_药学论文
作者：刘智勤，陈鹊汀，朱惠学， 蒋玉凤，李岩，黄启福
【摘要】 目的探讨六君子汤对化疗药物顺铂抗小鼠h22肝癌的增效减毒作用。方法无菌条件下抽取9 d生长良好的腹水为瘤源，按1∶3比例用生理盐水稀释，每鼠以0.2 ml于右侧腋窝皮下接种，24 h后随机分成荷瘤对照组、顺铂组、贞芪扶正胶囊+顺铂组、六君子汤高、中剂量+顺铂组。给药10 d，进行抑瘤率计算，脾脏、肾脏和胸腺重量、肾脏丙二醛（mda）、脾脏一氧化氮（no）、血清尿素氮（bun）和免疫球蛋白等的检测。结果六君子汤可提高顺铂对小鼠肝癌h22的抑瘤率（p﹤0.05），对抗化疗药物所致脾脏、胸腺萎缩，血清igg、igm水平的下降，降低化疗小鼠肾脏mda、脾脏no和血清尿素氮的含量（p﹤0.05或p﹤0.01）。结论六君子汤对化疗药物顺铂抗小鼠h22肝癌具有增效减毒的作用。
【关键词】 六君子汤 肝癌h22小鼠 顺铂 肿瘤化疗
abstract：objectiveto observe the chemotherapy-increasing effect and toxicity-decreasing of liujunzi decoction in h22 carcinomatous mice. methodstaking out ascites under asepsis which grew well for 9 days as the source of carcinoma and diluting it with salt water, then injecting 0.2 m1 diluent into the subcutaneous tissue of the right axilla of mice 24 hours after injection, mice were grouped as control group, cisplatin group, zhenqifuzheng capsule combined with cisplatin groups, and liujunzi decoction (high,middle dose) combined with cisplatin groups. after 10 days treatment, the tumor inhibition rate was calculated, the content of malondialdehyde (mda) in kidney , nitric oxide (no) in spleen and the level of serum urea nitrogen(bun) and immunoglobulin(ig) were detected.resultsliujunzi decoction could elevate the tumor-supression rate of cisplatin on h22 carcinomatous mice（p﹤0.05）,antagonize the toxic and side effects of cisplatin the atrophy of spleen and thoracic gland，the decrease of igg and igm. also it could decrease mda in kidney, no in spleen of carcinomatous and serum bun of mice (p﹤0.05 or p﹤0.01）. conclusionliujunzi decoction has the effect of increasing the effect of chemotherapy and decreasing its side-effect of cisplatin in h22 carcinomatous mice.
key words：liujunzi decoction； h22 carcinomatous mice； cisplatin； tumor chemotherapy
化疗是目前肿瘤治疗的主要手段之一，然而化疗常引起如骨髓抑制、免疫力低下等毒副反应，使患者难以坚持治疗。wwW.meiword.cOm故如何提高肿瘤组织对化疗的敏感性，减轻化疗毒副反应，是目前在肿瘤治疗领域中愈来愈引起人们重视，并且值得探讨的问题。六君子汤是常用的补益剂，研究表明，此方有增强免疫、抗肿瘤、保护脏器免受有害毒物损伤的作用［1］。当前中医药在肿瘤化疗中的减毒增效作用已被确立，但对六君子汤在肿瘤化疗中的增效减毒作用报道较少，且缺乏系统性和规范性，本研究通过建立h22荷瘤小鼠模型，探讨六君子汤联合化疗药物顺铂（cisplatin）治疗肿瘤是否具有减毒增效作用，以期为该方的临床应用提供一定实验依据。
1 材料与仪器
1.1 实验动物与瘤株
清洁级昆明小鼠，7～9周龄，雌雄各半，体质量18～22 g，由河北医科大学实验动物中心提供，许可证：scxk(冀)20xx-1-003。动物在实验前适应性驯养1周。饲料由河北医科大学实验动物中心提供。实验期间自由采食饮水。腹水型h22肝癌瘤株由河北医科大学实验动物中心提供。
1.2 药物
六君子汤主要由人参、白术、茯苓、甘草、陈皮、半夏等药物组成，由河北大学附属医院中药房提供,所有药品均经中药专家鉴定。取上述中药自来水浸泡1 h后，分别加8倍量、6倍量、4倍量的水煎煮3次，时间分别为药液熬开后40，30，20 min，将3次煎煮的药液混合，离心，取上清，80℃水浴浓缩至每毫升含生药0.8 g，高温消毒后置4℃冰箱保存备用。化疗药物：注射用顺铂，山东齐鲁制药有限公司出品(批号：h37021358)。阳性对照药：贞芪扶正胶囊，甘肃扶正药业科技股份有限公司出品(批号：z620xx414)。
1.3 仪器
雅培c8000型全自动生化仪，美国出品。nikon ys2双目生物显微镜。ae240电子天平为梅特勒-托利多仪器有限公司产品。sw-cj-1f超净工作台为苏净集团安泰公司产品。恒温水浴箱为天津市中环实验电炉有限公司出品。cd4-2a离心机为医用离心机厂产品。752型紫外可见分光光度计。
2 方法
2.1 动物模型的建立及分组给药
参照文献［2］建立 h22荷瘤小鼠模型。小鼠接种24 h后随机分成荷瘤对照组、顺铂组、贞芪扶正胶囊+顺铂组、六君子汤高剂量+顺铂组、六君子汤中剂量+顺铂组。荷瘤对照组用生理盐水灌胃，0.4 ml/只，1次/d，连续10 d。单纯化疗组腹腔注射顺铂 （3.5 mg/kg）0.2 ml/只，1次/d，连续用5 d［3］，同时用生理盐水灌胃，0.4 ml/只，1次/d，连续10 d。六君子汤高、中剂量组和阳性对照组的化疗药物剂量、给药途径及时间与单纯化疗组相同，中药剂量为0.4 ml/只，1次/d，连续10 d。各组于瘤细胞接种第2日开始用药，于实验第12天眼球采血后处死小鼠，取脾脏、胸腺和肾脏检测各项指标。
2.2 样品的处理和测定
2.2.1 抑瘤率计算
于实验第12天，将各组小鼠眼球采血后处死，称重，依次用碘酊酒精消毒操作部位皮肤，于超净工作台上，以无菌操作从腋部皮下完整剥取肿瘤组织，剥离干净后于电子天平称瘤体重量并按公式计算抑瘤率［4］。
公式：抑瘤率（%）=（1-t/c）×100% （t/c指治疗组平均瘤重/对照组平均瘤重）
2.2.2 脾脏、胸腺和肾脏称重动物处理同“2.1”项，以无菌操作取下脾脏、胸腺和肾脏，电子天平称重。
2.2.3 脾脏no检测动物处理同实验“2.1”项，以无菌操作取下脾脏，电子天平称重，用生理盐水将脾脏制成10%组织匀浆，以双缩尿法定蛋白，然后采用硝酸还原酶法检测no（按南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书操作）。
2.2.4 血清免疫球蛋白和bun的检测
动物处理同“2.1”项，雅培c8000型全自动生化仪检测免疫球蛋白和bun。
2.2.5 肾组织中丙二醛( mda )的检测
冰生理盐水洗净肾脏，滤纸吸干，称取0.1 g肾组织，用冰生理盐水1∶9稀释后研磨成10%的组织匀浆，按南京建成生物工程研究所的试剂盒说明书操作检测肾组织中mda的含量。
2.3 统计学处理各组数据以±s表示，采用spss11.5 for windows统计软件进行单因素方差（one-way anova）。
3 结果
3.1 一般情况
瘤细胞接种后3 d，于小鼠右腋下接种部位可触及米粒大小的瘤结节，之后逐渐长大。单纯化疗组及六君子汤各治疗组小鼠肿瘤生长的势头均不及荷瘤对照组。单纯化疗组及各治疗组小鼠。在腹腔注射顺铂后，状况明显不及荷瘤对照组，小鼠出现毛无光泽而稀疏脱落，少动，稀便，懒于觅食，且这种状况日益加重，尤其是单纯化疗组明显。
3.2 六君子汤对化疗小鼠体质量增长的影响
结果见表1。表1 六君子汤对化疗小鼠体质量增长的影响（略）
3.3 六君子汤对化疗小鼠瘤重及抑瘤率的影响
结果见表2。表2 六君子汤对顺铂治疗荷瘤小鼠的增效作用（略）
2.4 六君子汤对化疗小鼠免疫器官重量的影响
结果见表3。表3 六君子汤对化疗小鼠免疫器官重量的影响（略）
3.5 六君子汤对化疗小鼠脾脏no的影响
结果见表4。表4 六君子汤对化疗小鼠脾脏no的影响（略）
3.6 六君子汤对化疗小鼠血清免疫球蛋白的影响
结果见表5。表5 六君子汤对化疗小鼠血清免疫球蛋白的影响（略）
3.7 六君子汤对化疗小鼠肾脏系数、bun水平和肾组织中丙二醛的影响
结果见表6。表6 六君子汤对化疗小鼠肾脏系数、血清bun水平和肾组织中丙二醛的影响（略）
4 讨论
中医药在肿瘤化疗中的增效减毒作用，是目前肿瘤综合治疗研究中的热点之一，也是中医中药研究热点之一。探讨提高肿瘤化疗疗效，减轻其副作用的组方药物，在临床上，具有重要的意义。六君子汤源自《妇人良方》，系在四君子汤方的基础上加陈皮、半夏，功擅健脾止呕，主治脾胃气虚兼有痰湿，症见恶心呕吐、食欲不振、胸脘痞闷、四肢无力、面色萎黄等症状，其所治疗诸症恰恰为化疗中常见。现代药理实验证明［1］六君子汤中除半夏外，均具有增强机体免疫功能，提高巨噬细胞吞噬功能的作用；人参、白术、茯苓、半夏均能抑制肿瘤体积和重量增长，降低癌组织的转移和侵袭；甘草除具有提高免疫功能外，且能促进小鼠脾细胞干扰素的产生，对小鼠肝脏中nk细胞活性有显著增强作用。本实验结果显示，六君子汤高剂量组能增强顺铂对h22小鼠的抑瘤活性，与单用顺铂相比，统计学差异显著，提示六君子汤对顺铂抗移植肿瘤生长具有一定增效作用。
肿瘤的存在不仅抑制机体的细胞免疫功能，也抑制了体液免疫功能［5］,而化疗药物应用可加重机体的免疫抑制,因此提高肿瘤患者的免疫功能，尤其是化疗后出现的严重免疫功能抑制，成为抗肿瘤治疗的一个主要方面。no是较小的生物活性分子，对机体免疫功能的影响是多方面的，一般认为，no的产生常伴有免疫功能的抑制，表现为有丝减低、巨噬细胞功能低下、淋巴细胞增殖减慢、抗体产生及多种细胞因子分泌受抑等［6］。本实验结果表明，单纯化疗组小鼠no较荷瘤对照组高，说明化疗药的毒性作用可脾脏巨噬细胞产生no，从而引起机体免疫功能受抑，六君子汤合用顺铂的小鼠no低于单纯化疗组，实验还发现六君子汤可对抗化疗药物顺铂所致的脾脏和胸腺的萎缩，免疫球蛋白水平下降，说明六君子汤能促进机体免疫功能的恢复。
顺铂是能与肿瘤细胞dna共价结合的金属化合物,在临床化疗中应用广泛,目前已被公认为治疗睾丸癌、卵巢癌和宫颈癌的一线药物，但顺铂作为一种细胞毒物,临床用药产生的副作用较多且严重。研究表明,顺铂具有重金属类物质的毒副作用,可引起严重的肾、胃肠道和神经毒性,其中最主要的是对肾脏的毒性作用,往往因严重的肾功能损伤而限制了药物的使用［7］。丙二醛（mda）是脂质过氧化反应链中的终产物，它的产生一方面与脂质过氧化侵害有关，另一方面与机体抗氧化系统酶活性有关。因而测试mda的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反应出细胞损伤的程度。本实验结果表明:六君子汤联用顺铂后肾组织中mda值明显低于顺铂组，提示六君子汤可减少过氧化产物mda的生成，抑制脂质过氧化，从而防止或减轻肾脏的过氧化损伤，本实验还发现荷瘤小鼠用顺铂治疗后，血清bun明显增高，而高剂量六君子汤与顺铂合用的小鼠，血清bun有所降低，提示六君子汤对顺铂引起的肾毒性有一定防治作用。
综上所述，六君子汤与顺铂合用可增强其抑制肿瘤生长的作用，同时减轻了顺铂所致的免疫功能低下和肾脏损害，从而起到了增效减毒作用，这为六君子汤在肿瘤化疗中的应用提供了实验依据。
【参考文献】
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第四篇 温莪术挥发性化学成分分析和指纹图谱研究_药学论文
作者：万明珠，梁逸曾，赵晨曦，陈爱明，曾茂茂
【摘要】 目的对10个来源不同的中药温莪术挥发油的化学成分进行定性定量，建立指纹图谱。方法采用气相色谱-质谱联用仪（gc-ms）并运用化学计量学方法辅助定性，运用“计算机辅助相似性评价系统”软件建立指纹图谱及其共有模式。结果10个样品共鉴定出34个共有组分，主要共有成分为桉叶素（eucalyptol）、榄香烯（elemene）、莪术烯（curzerene）、β-榄烯酮（β-elemenone）、吉马酮（germacrone）、莪术二酮（curdione）、新莪术二酮（neocurdione）。所建立指纹图谱共有模式结果良好。结论指纹图谱和定性相结合是温莪术质量控制的一种好方法。
【关键词】 气相色谱-质谱联用 温莪术 挥发油 纹图谱共有模式
abstract：objective to yze the chemical composition in volatile oil from curcuma aromatic sali. and establish the chromatographic fingerprints of the oil samples. methodsvolatile oils were investigated by gas chromatography mass spectrometry (gc-ms) combined with chemometrics method.the chromatographic fingerprints as well as its common model was established by drawing assistance from “computer aidede similarity evaluation”. resultstotally thirty-four common compounds were identified, of which eucalyptol, elemene, curzerene, β-elemenone,germacrone,curdione and neocurdione were the major compounds. there was a little difference in the chemical composition among the ten samples but in percentages on many levels.on the other hand,the common model of chromatographic fingerprints was believable.conclusionthe common model of chromatographic fingerprints established on the ten samples provides theoretical basis for appraisal and quality control of commercial volatile oil from curcuma aromatic sali..
key words： gas chromatography-mass spectrometry (gc-ms); curcuma aromatica sali.; volatile oil; common model of chromatographic fingerprints
中药温莪术、温郁金和片姜黄为姜科姜黄属植物温郁金curcuma wenyujin y.h.chen et c.ling不同部位经由不同的炮制方法而成的3种中药，其性味与功能既相似又不同［1，2］，如何界定三者的有效成分和建立科学的质量控制标准成为研究的难题；另外，温莪术curcuma aromatica sali.又与广西莪术curcuma kwangsiensis s. g.lee et c. f. liang、蓬莪术curcuma phaeocaulis val.归为莪术类，此3种中药虽植物来源皆不相同，但其行为与功能极其相似，亦难辨别。WwW.meiword.cOm本文采用气相色谱-质谱联用法对温莪术挥发油的化学成分进行，建立温莪术挥发油的标准指纹图谱和共有模式，从整体上反映药品内在成分，易于对中药温莪术进行质量控制。
1 仪器与材料
6890/5973n型气相色谱-质谱联用仪（美国安捷伦公司）；正己烷（ar，500 ml/瓶，国药集团化学试剂有限公司）。10个温莪术挥发油样品由佳木斯大学药学系生药教研室方洪壮教授和天瑞制药公司提供。
2 方法
2.1 测定条件
2.1.1 色谱条件hp-5ms弹性石英毛细管柱（30 mm×0.25 mm×0.25 μm）；载气:he；载气流速:1.0 ml·min-1；进样口温度:280 ℃；采用程序升温，初始温度80 ℃，以4 ℃·min-1速率升至220 ℃；进样量:1 μl；分流比为50∶1。
2.1.2 质谱条件离子源:电子轰击(ei)离子源；电子能量:2 400 ev；离子源温度:230 ℃；接口温度:280 ℃；扫描范围:30～450 amu；扫描速度:3.46 scans·s-1。
2.2 数据处理数据所采用程序均由中南大学中药现代化研究中心开发研制(matlab6.5编写)。 所分辨的质谱在nist02标准质谱库中检索。对于部分重叠峰，则采用化学计量学方法进行解析得到纯色谱峰和纯质谱后，再与质谱库对照定性。采用峰面积归一化法确定各成分的相对含量。
3 结果
3.1 温莪术挥发油定性定量在上述的实验条件下，经过gc-ms得到10个温莪术挥发油的化学组分总离子流图见图1，色谱峰基线分离情况较理想, 但也有个别色谱峰有重叠现象，影响定性结果的准确性和可靠性。本文采用直观推导式演进特征投影法 ［3～6］对重叠色谱峰进行解析并结合文献［7～9］鉴定出10个温莪术挥发油样品中34个组分，占各挥发油样品总量的78.03%以上。结合10个温莪术挥发油的指纹图谱（图1）可以初步判断10个不用来源样品具有高度相似性，为建立共有模式提供了先行依据，预期了共有模式的可靠性。本文并采用峰面积归一化积分法定量，定性与定量结果见表2。表2 温莪术挥发油组分的定性定量结果
3.2 温莪术挥发油gc-ms指纹图谱共有模式的建立中药指纹图谱技术与传统质量控制模式不同，它从整体上反应中药复杂成分的面貌，“模糊性”和“整体性”是指纹图谱的基本特征，也是体现指纹图谱相似性的依据。作为一种有效的质量控制手段，国家药典委员会20xx-04-27颁发的《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南（试行）》指出“指纹图谱的评价指标是供试品指纹图谱与该品种对照用指纹图谱（共有模式）及供试品之间指纹图谱的相似性”。共有模式的建立通常有均值法和中位数法两种，为增加结果的可靠性，两种方法均被本研究采用。
具体做法如下:使用“计算机辅助相似性评价系统”软件对所得到的10个温莪术挥发油原始指纹图谱进行基线校准和保留时间漂移校准后得到如图1的温莪术挥发油标准指纹图谱，在此基础上建立标准指纹图谱的共有模式（见图2）。计算各挥发油样品指纹图谱与建立的标准指纹图谱共有模式的相似度，具体结果列于表1中。根据国家药典委员会颁布的要求，相似度计算结果在0.9～1.0之间符合要求。按照样品编号1～10的顺序，除3号样品相似度偏低外（>0.93）其余9个温莪术挥发油样品相似度均达到0.96以上，符合标准要求，因此作者并未进行剔除3号样品二次建立共有模式的工作。此法建立的共有模式简单可靠，可用于质量控制。表1 温莪术样品指纹图谱的相似性（略）4 讨论
所得温莪术挥发油以桉叶素（eucalyptol）、榄香烯（elemene）、莪术烯（curzerene）、β-榄烯酮（β-elemenone）、吉马酮（germacrone）、莪术二酮（curdione）、新莪术二酮（neocurdione）为主要成分，它们的含量均占各挥发油样品鉴定总量的68%以上，其中又以curzerene(莪术烯)和curdione(莪术二酮)为主（44%以上），此二者峰（图2a峰、b峰）可作为参照峰辅助共有模式图谱共同进行质量控制和产品鉴定。
由于姜黄属品种间挥发性成分差异较大,特征成分的选择趋于片面，建立几种药材共有指纹图谱的难度较大，更适宜建立单一品种的挥发油指纹图谱［10］。综合本实验室采集样品的条件，本实选定温莪术作为单一研究对象建立其指纹图谱，以期有助于温莪术的质量控制。在今后的工作中，可以采集姜黄属的其它品种作为指纹图谱的研究对象，建立姜黄属植物挥发油指纹图谱库，为我国传统中药现代化生产实践提供实践依据。
目前，简单的测定几种特征物质、辨别几个特征峰控制中药质量的传统方法存在一些不足，它缺乏从整体上把握中药复杂体系的质量信息，因此建立系统的、全面的反映中药化学成分的指纹图谱成为一种有效的中药质量评价和控制的手段。
本文建立的中药温莪术质量评价和控制的方法，考虑了指纹图谱（共有模式）及其组分定性两方面，可以说是指纹图谱（共有模式）与组分定性结合的双重控制。相比单一手段而言，它既从大处着眼又在细节把握，为温莪术质量控制提供新的质量控制手段。
致谢：感谢佳木斯大学药学系生药教研室方洪壮教授和天瑞制药公司提供温莪术挥发油样品！
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第五篇 蒲薏颗粒药效学实验研究_药学论文
作者：迟明艳 黄勇 王爱民 兰燕宇 王永林
【摘要】 目的对蒲薏颗粒进行药效学研究。方法观察蒲薏颗粒对荷瘤(h22)小鼠增效减毒作用，对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响，对体外培养人食管癌(eca-109)细胞的影响，对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果蒲薏颗粒能增强化疗药物抑瘤作用、拮抗化疗药物对wbc及骨髓有核细胞的抑制;对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用;并显著抑制eca-109细胞增殖的细胞毒作用;同时该药具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。结论蒲薏颗粒具有抗癌和增强免疫作用。
【关键词】 蒲薏颗粒; 抗肿瘤; 免疫增强
蒲薏颗粒由蒲公英、生薏苡仁等5味中药组成，具有清热解毒、活血化瘀、补益气血的功效，临床用于肿瘤放、化疗所致的气血两虚有很好的疗效，我们根据其功能主治进行了有关的主要药效学实验。
1 材料
1.1 动物 km小鼠，雄性，体重18～22 g;sd大鼠，雄性，体重180～210 g，均由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：scxk(黔)20xx-0001。balb/c小鼠(spf级)，雄性，体重16～20 g，简阳市简城比尔动物养殖场提供，动物合格证号：0011159。wWW.meiword.cOm
1.2 瘤株 小鼠肝癌h22：由华西医科大学肿瘤研究所提供;艾氏腹水癌(eac)细胞，由重庆医科大学生物工程系超声研究所提供。人食管癌细胞(eca-109)：由中科院生命科学研究所提供。
1.3 药物 蒲薏颗粒(py)由贵州渝生制药有限公司提供，每克颗粒含4g生药，批号：20xx0306;环磷酰胺(ctx)，上海华联制药有限公司生产，批号：031001;5-氟尿嘧啶(5-fu)，上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405;噻唑蓝(mtt)：sigma公司出品，批号：206-069-5。
2 方法与结果
2.1 蒲薏颗粒对小鼠肝癌h22化疗的增效减毒作用[1～3]在无菌条件下于小鼠右腋皮下接种2×107/ml的h22细胞悬液，0.2 ml/只，24 h后按体重随机分为模型对照组，5-fu组，py高、低剂量组，5-fu加py高剂量组，5-fu加py低剂量组。各组小鼠按表1的剂量灌胃(ig)给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量生理盐水(ns)。停药次日称重后，摘眼球取血作外周血象检查，脱颈椎处死动物，剖取并称重瘤块，计算抑瘤率。剥离小鼠右股骨，用1640培养液通过针头反复冲洗骨髓并测定洗液中骨髓有核细胞数。见表1。
肿瘤抑制率(%)=(1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重)×100%
由表1结果可见，蒲薏颗粒与5-fu合用，可使5-fu的肿瘤抑制率明显提高;白细胞、骨髓有核细胞计数也有显著性差异(p<0.05或p<0.01);提示蒲薏颗粒具有增效减毒的作用。表1 对小鼠肝癌h22化疗的增效减毒作用与模型对照组比较，p<0.05，p<0.01;与5-fu组比较，xxp<0.05，xxxxp<0.01;n=10
2.2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响 [4～5]于无菌条件下小鼠腹腔常规接种艾氏腹水癌小鼠(1×108/ml)的细胞悬液，瘤液0.2 ml/只，接种后24 h，按体重随机分为5组：模型对照组，ctx组(20 mg/kg)，py高、中、低剂量组，各组小鼠按表2的剂量ig给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量ns。记录存活天数，计算生命延长率，比较各组间差异。结果见表2。
生命延长率(%)=给药组平均生存时间-对照组平均生存时间对照组平均生存时间×100%表2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响由表2结果可见，蒲薏颗粒高、中、低剂量组eac荷瘤小鼠生存时间与模型对照组比较均有显著差异,生命延长率最高达50%以上,表明该药对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用。
2.3 对体外培养人食管癌(eca-109)细胞的影响[1]取大鼠30只，随机分为对照组(ns 10 ml/kg)、环磷酰胺组 (20 mg/kg)、蒲薏颗粒组(12 g/kg)。各组动物分别ig给药，1次/d，连续7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，无菌条件下股动脉取血，4℃ 2 500 r/min离心25 min，吸取血清，同组血清混匀，以0.22 μm微孔滤膜正压过滤除菌，各组保留部分全血清，其余血清用1 640分别配成含鼠血清60%，30%，15%的培养基，-40℃保存备用。
取在对数生长期的人食管癌细胞标准株(eca-109)，用胰酶消化后，稀释成 1×105个/ml，台盼蓝染色，检测活细胞达95%以上。分别将肿瘤细胞接种于96孔板，每孔100 μl，培养24 h后，观察细胞贴壁后，分别换成含不同浓度大鼠血清培养基，每组10个平行孔。培养24 h，每孔内加入5 mg/ml mtt10 μl，继续培养4 h，弃去培养孔内培养基，每孔加入二甲基亚砜100 μl，待蓝色结晶完全溶解后，用酶标仪(波长490 nm)测定各孔吸光度(a)。见表3。
细胞毒活性(%)=(1-实验组od值对照组od值)×100% 表3 含药血清对eca-109细胞的细胞毒活性与相应浓度对照组鼠血清比较,p<0.05，p<0.01;n=10
与相应血清浓度的对照组比较，蒲薏颗粒各剂量组的od值明显减小，差异显著(p﹤0.05，p﹤0.01)，高剂量组细胞毒活性大于20%。显示蒲薏颗粒有显著的抑制eca-109细胞增殖的细胞毒作用。
2.4 对荷瘤(s180)小鼠细胞免疫功能的影响balb/c小鼠，在无菌条件下，接种s180细胞悬液，0.2 ml/只，接种后24 h，分组，给药方法见表4。分别于给药的第3天和第6天动物皮下注7%的2.4-二硝基氯苯丙酮液0.02 ml/只致敏。于第1次致敏的第10天，动物一侧耳用1%的2.4-二硝基氯苯甘油溶液0.02 ml进行涂布攻击，另侧耳作对照，24 h后处死动物，剪下两耳，打孔器取耳片，称重，以左右两耳片的重量差作为肿胀度，比较各组间差异。同时取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数和脾脏指数。见表4。
由表4结果可见，蒲薏颗粒可使荷瘤小鼠降低的迟发型超敏反应水平、胸腺指数和脾脏指数明显改善，具有提高荷瘤小鼠的细胞免疫水平作用。表4 对荷瘤(s180)小鼠细胞免疫功能的影响与模型对照组比较，p<0.05，p<0.01
3 讨论
“蒲薏颗粒”处方为贵州省民间中医祖传经验方，临床应用五十余年，由蒲公英、薏苡仁等5味药组成。方中蒲公英清热解毒、消肿散结，利尿通淋。现代药理学研究其主要成分蒲公英多糖是一种免疫促进剂，其抗癌活性与免疫激活效果有关[6];薏苡仁清热排脓、健脾渗湿，伸筋除痹痛，其中的薏苡仁内酯能抑制艾氏腹水癌，而且能参与机体免疫功能，提高机体的免疫监视[7]。方中其他3味药：何首乌、灵芝、三棱则扶正以助君臣药的祛邪之功。
本实验结果也表明，蒲薏颗粒确有抗癌和免疫增强作用，从而在实验研究上为蒲薏颗粒治疗恶性肿瘤提供了理论依据,同时印证了蒲薏颗粒的临床疗效。
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第六篇 几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖的实验研究_药学论文
作者：李妍，鞠晓红，任旷，李强，钟越
【摘要】 目的4种不同中药单体对非小细胞肺癌spca-1的生长抑制作用，为其临床应用提供实验依据。方法采用wst-1还原法不同浓度斑蝥素(2.5，5.0，10，20 mg/ml)、去甲基斑蝥素(2.5，5.0，10，20 mg/ml)、β-榄香烯(5，10，20，40 mg/ml)和大黄素(10，20，40，80 mg/ml)对spca-1细胞生长增殖的影响。结果β-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素均能抑制非小细胞肺癌增殖，且呈剂量依赖性，其中去甲斑蝥素的抗肿瘤活性最强，ic50为(7.62±1.35) mg/l。结论4种中药单体成分均能抑制肿瘤细胞spca-1的生长增殖，其中显著导致细胞生长抑制的是去甲基斑蝥素和斑蝥素。
【关键词】 肿瘤; 中药; 斑蝥素; β-榄香烯; 大黄素; 去甲基斑蝥素
肺癌是常见的恶性肿瘤,其发病率、病死率在我国居前列，其中非小细胞肺癌的预后比较差。尽管现在的治疗不断取得进展，生存率提高得还是很少[1]。寻找有效的抗癌药物成为肿瘤治疗领域的重要研究内容。中医药在肿瘤治疗中的应用日益受到关注。Www.meiword.COM随着中药有效组分分离、纯化和结构修饰技术的进步，从中药中寻找高效、低毒的抗癌成分已经成为新药开发的重要途径。筛选肺癌细胞敏感的中药单体成分，将有助于推动中药在肺癌治疗中的应用，改进肺癌的治疗效果。本实验了4种不同的中药单体对非小细胞肺癌spca-1的生长抑制作用，以期为临床治疗非小细胞肺癌提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料肺癌细胞株spca-1购自美国典型生物收藏中心(american type culture collection ，atcc)。rpmi-1640培养液购自sigma公司，小牛血清购自黄岩四季青生物试剂有限公司。斑蝥素和去甲基斑蝥素购自大连市医药科学研究所，β-榄香烯购自大连金港制药厂，大黄素购自复旦大学药学院天然药物研究所。wst-1细胞增殖检测试剂盒购自江苏碧云天生物技术公司。
1.2 细胞培养 spca-1细胞用含10%小牛血清的rpmi1640培养液，在37℃，5% co2，饱和湿度的条件下连续传代培养，2 d更换1次培养液，实验时取对数生长期细胞。
1.3 细胞增殖检测取对数生长期细胞，用0.05%胰酶和0.02 % edta消化，1 000 r/min离心5 min收集细胞，调细胞密度为2×104/ml，接种于96孔板，100 μl/孔。待细胞贴壁生长后，分别加入β-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素4种中药成分至终浓度，液体总量200 μl/孔，每组做4复孔，为实验组(t)。另外设置不加药物的对照组(c) 和不加wst-1溶液的空白对照组(b)。继续培养72 h，参照 wst-1试剂盒说明，检测4种中药单体对细胞增殖抑制的作用。简言之：除空白对照孔外，每孔加入wst-1溶液20 ml，在37℃培养2 h后，酶联检测仪检测450 nm的吸光度值(a450)。按下列公式计算细胞增殖抑制率(inhibition rate )，并以3次生物学实验的平均值表示最终实验结果。绘制药物浓度-细胞生长曲线，计算抑制50%细胞生长的药物浓度(inhibitory concentration 50%,ic50)。
细胞增殖抑制率(%)=[1-(a450t-a450b)/(a450c-a450b) ]×100%
1.4 形态学观察对数生长期细胞分别加入不同浓度β-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素继续培养72 h后，收集细胞，光镜下观察、拍照。
2 结果
2.1 4种药物对细胞的抑制作用去甲斑蝥素、斑蝥素、β-榄香烯和大黄素对spca-1细胞的抑制作用见图1。去甲斑蝥素，斑蝥素，β-榄香烯和大黄素均能抑制spca-1细胞增殖，并呈剂量依赖性，其中去甲斑蝥素的抗肿瘤作用最显著， ic50为7.62±1.35 mg/l, 其次为斑蝥素，ic50为(9.14±1.69) mg/l, β-榄香烯和大黄素的ic50分别为(16.71±3.54) mg/l和(23.65±3.87) mg/l。
2.2 药物作用下细胞形态学变化不同中药单体作用24 h，光镜下观察生长状况和细胞形态的变化。与对照组相比，随着去甲斑蝥素浓度的增加，视野中细胞的数量减少，即细胞生长受抑制;同时非贴壁细胞的圆形细胞(g2/m期细胞)比例增加，斑蝥素对细胞生长和形态影响与去甲斑蝥素相似(见图2);β-榄香烯随着浓度的增加，视野中细胞的数量减少，即细胞生长受抑制;同时细胞膜起泡和核皱缩的细胞(凋亡细胞)比例增加;大黄素对细胞生长抑制作用也随药物浓度增加而增强(见图3)。
3 讨论
中药治疗肿瘤已取得了较好效果，愈来愈受到国内外的关注。我国中药资源丰富，从中寻找抗癌活性成分是新药开发的良好途径。在各种恶性肿瘤中，非小细胞肺癌是发病率最高的肿瘤，传统的手术切除、放疗、化疗是主要的治疗方法，但治疗结果往往难令人满意。筛选有效的中药成分单独应用或与化疗药物联合应用，可能为非小细胞肺癌的治疗提供新的选择和契机。
斑蝥素是广泛存在于一千五百多种斑蝥体内的一种天然防御性毒素，能抑制蛋白磷酸酯酶1 (pp1)和蛋白磷酸酯酶2a (pp2a)的活性、增强p53的功能，并能影响肿瘤细胞蛋白质的合成过程，医治疾病已有二千多年的历史[2]。去甲斑蝥素是我国研制合成的斑蝥素衍生物，与斑蝥素相比，少了2，3位甲基，毒副作用大大降低,对肺癌、肝癌、结肠癌、胆囊癌和乳腺癌等有明显抑制作用[3，4]。去甲斑蝥素抗癌作用机制是多方面的，越来越多的实验结果显示去甲斑蝥素可通过抑制血管生成从而达到抑制肿瘤生长的作用[5～7]，进一步提示去甲斑蝥素在肿瘤治疗中的潜在价值。β-榄香烯是从中药温莪术挥发油中提取的萜烯类化合物，而大黄素为中药大黄中提纯的蒽醌类衍生物。体外研究表明，β-榄香烯和大黄素均对肝癌、结肠癌、乳腺癌和宫颈癌细胞有一定的抑制作用。用细胞生物学和分子生物学技术阐明中药的作用机制是促进其应用的前提，我们以非小细胞肺癌spc-a-1 为模型，比较研究斑蝥素、去甲斑蝥素、β-榄香烯和大黄4种中药成分的抗肿瘤活性以及作用机制。
本实验结果表明，斑蝥素、去甲斑蝥素、β-榄香烯和大黄素对spca-1细胞增殖均有抑制效应，其中去甲斑蝥素的抗肿瘤活性最强，ic50值为(7.62±1.35) mg/l。细胞增殖过剩和细胞凋亡下降是恶性肿瘤形成的原因，抗肿瘤制剂对细胞周期和细胞凋亡的影响是研究其抗癌机制的关键指标。4种中药成分均能诱导一定程度的细胞凋亡，斑蝥素和去甲斑蝥素显著的导致g2/m期的阻滞，而b-榄香烯和大黄使细胞阻滞于g1期和s1期。通过上述指标的表明，斑蝥素和去甲斑蝥素抑制spca-1增殖主要与有丝阻滞和诱导细胞凋亡有关;而β-榄香烯和大黄可能主要作用于g1和s期。调控细胞周期和细胞凋亡的机制复杂，上述中药成分影响肿瘤细胞周期、诱导细胞凋亡的分子机制还有待于进一步研究探索。
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